J Pineal Res. 2001 Apr;30(3):139-46. doi: 10.1034/j.1600-079x.2001.300302.x.
Espressione e caratterizzazione funzionale del recettore mt1 della melatonina dal cervello di ratto in oociti di Xenopus: evidenza dell'accoppiamento con la via di segnalazione del fosfoinositolo
Astratto
I recettori sensibili alla melatonina sono stati espressi negli ovociti di Xenopus laevis in seguito a un'iniezione di mRNA proveniente dal cervello di ratto. La somministrazione di 0,1-100 micromoli/L di melatonina agli ovociti sottoposti a clampaggio di tensione attiva le correnti di cloro calcio-dipendenti tramite una proteina G sensibile alla tossina pertussica e la via del fosfoinositolo. Per determinare quale tipo di recettore della melatonina (mt1, MT2, MT3) sia funzionalmente espresso negli ovociti di Xenopus, abbiamo utilizzato (i) agonisti e antagonisti di diversi tipi di recettori per caratterizzare il profilo farmacologico dei recettori espressi e (ii) una strategia di inibizione della funzione dei recettori della melatonina mediante oligonucleotidi antisenso. Durante lo screening farmacologico, la somministrazione degli agonisti 2-iodomelatonina e 2-iodo-N-butanoil-5-metossitriptamina (IbMT) agli ovociti ha provocato correnti di membrana oscillatorie, mentre la somministrazione dell'agonista MT3 5-metossicarbonilammino-N-acetiltriptamina (GR135,531) non ha esercitato correnti di membrana rilevabili. La risposta della melatonina è stata abolita dalla somministrazione precedente degli antagonisti 2-fenilmelatonina e luzindolo, ma non è stata influenzata dall'antagonista MT3 prazosina e dall'antagonista MT2 4-fenil-2-propionamidotetralina (4-P-PDOT). Negli esperimenti antisenso, nel gruppo di controllo la risposta della melatonina si è verificata in 45 dei 54 ovociti iniettati con mRNA (83%). La co-iniezione dell'oligonucleotide antisenso, corrispondente all'mRNA del recettore mt1, ha causato una marcata e significativa riduzione del livello di espressione (13%; P < 0,001). In conclusione, i risultati dimostrano che l'iniezione di mRNA proveniente dal cervello di ratto negli ovociti di Xenopus ha indotto l'espressione del recettore mt1, che è accoppiato alla via del fosfoinositolo.
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